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Attività larvicida e antitermite dei biotensioattivi microbici prodotti da Enterobacter cloacae SJ2 isolati dalla spugna Clathria sp.

L’uso diffuso di pesticidi sintetici ha portato a molti problemi, tra cui la comparsa di organismi resistenti, il degrado ambientale e danni alla salute umana.Dunque, nuovo microbicopesticidisicuri per la salute umana e l’ambiente sono urgentemente necessari.In questo studio, il biotensioattivo ramnolipidico prodotto da Enterobacter cloacae SJ2 è stato utilizzato per valutare la tossicità per le larve di zanzara (Culex quinquefasciatus) e termiti (Odontotermes obesus).I risultati hanno mostrato che c’era un tasso di mortalità dose-dipendente tra i trattamenti.Il valore LC50 (concentrazione letale al 50%) a 48 ore per i biotensioattivi di termiti e larve di zanzara è stato determinato utilizzando un metodo di adattamento della curva di regressione non lineare.I risultati hanno mostrato che i valori LC50 a 48 ore (intervallo di confidenza al 95%) dell’attività larvicida e antitermite del biosurfattante erano rispettivamente 26,49 mg/L (intervallo da 25,40 a 27,57) e 33,43 mg/L (intervallo da 31,09 a 35,68).Secondo l'esame istopatologico, il trattamento con biosurfattanti ha causato gravi danni ai tessuti degli organelli delle larve e delle termiti.I risultati di questo studio indicano che il biosurfattante microbico prodotto da Enterobacter cloacae SJ2 è uno strumento eccellente e potenzialmente efficace per il controllo della Cx.quinquefasciatus e O. obesus.
I paesi tropicali sono colpiti da un gran numero di malattie trasmesse dalle zanzare1.La rilevanza delle malattie trasmesse dalle zanzare è diffusa.Ogni anno muoiono di malaria più di 400.000 persone e in alcune grandi città si registrano epidemie di malattie gravi come dengue, febbre gialla, chikungunya e Zika.2 Le malattie trasmesse da vettori sono associate a un'infezione su sei in tutto il mondo, di cui le zanzare sono la causa principale. casi significativi3,4.Culex, Anopheles e Aedes sono i tre generi di zanzare più comunemente associati alla trasmissione della malattia5.La prevalenza della febbre dengue, un’infezione trasmessa dalla zanzara Aedes a Egypti, è aumentata negli ultimi dieci anni e rappresenta una significativa minaccia per la salute pubblica4,7,8.Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), oltre il 40% della popolazione mondiale è a rischio di febbre dengue, con 50-100 milioni di nuovi casi che si verificano ogni anno in più di 100 paesi9,10,11.La febbre dengue è diventata un grave problema di salute pubblica poiché la sua incidenza è aumentata in tutto il mondo12,13,14.La zanzara Anopheles gambiae, comunemente nota come zanzara Anopheles africana, è il più importante vettore della malaria umana nelle regioni tropicali e subtropicali15.Il virus del Nilo occidentale, l'encefalite di St. Louis, l'encefalite giapponese e le infezioni virali di cavalli e uccelli sono trasmessi dalle zanzare Culex, spesso chiamate zanzare domestiche comuni.Inoltre, sono anche portatori di malattie batteriche e parassitarie16.Esistono più di 3.000 specie di termiti nel mondo e esistono da più di 150 milioni di anni17.La maggior parte dei parassiti vive nel terreno e si nutre di legno e prodotti in legno contenenti cellulosa.La termite indiana Odontotermes obesus è un importante parassita che provoca gravi danni a importanti colture e piantagioni di alberi18.Nelle zone agricole, le infestazioni di termiti a vari stadi possono causare enormi danni economici a diverse colture, specie arboree e materiali da costruzione.Le termiti possono anche causare problemi alla salute umana19.
La questione della resistenza da parte di microrganismi e parassiti negli odierni settori farmaceutico e agricolo è complessa20,21.Pertanto, entrambe le società dovrebbero cercare nuovi antimicrobici economicamente vantaggiosi e biopesticidi sicuri.I pesticidi sintetici sono ora disponibili e hanno dimostrato di essere infettivi e di respingere gli insetti utili non bersaglio22.Negli ultimi anni, la ricerca sui biotensioattivi si è ampliata grazie alla loro applicazione in vari settori.I biotensioattivi sono molto utili e vitali in agricoltura, bonifica del suolo, estrazione del petrolio, rimozione di batteri e insetti e lavorazione degli alimenti23,24.I biosurfattanti o tensioattivi microbici sono sostanze chimiche biosurfattanti prodotte da microrganismi come batteri, lieviti e funghi negli habitat costieri e nelle aree contaminate dal petrolio25,26.I tensioattivi e i biotensioattivi di derivazione chimica sono due tipi ottenuti direttamente dall'ambiente naturale27.Vari biosurfattanti sono ottenuti da habitat marini28,29.Pertanto, gli scienziati sono alla ricerca di nuove tecnologie per la produzione di biotensioattivi a base di batteri naturali30,31.I progressi in tale ricerca dimostrano l’importanza di questi composti biologici per la protezione dell’ambiente32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium e questi generi batterici sono rappresentanti ben studiati23,33.
Esistono molti tipi di biosurfattanti con un'ampia gamma di applicazioni34.Un vantaggio significativo di questi composti è che alcuni di essi hanno attività antibatterica, larvicida e insetticida.Ciò significa che possono essere utilizzati nell'industria agricola, chimica, farmaceutica e cosmetica35,36,37,38.Poiché i biosurfattanti sono generalmente biodegradabili e benefici per l’ambiente, vengono utilizzati nei programmi di gestione integrata dei parassiti per proteggere le colture39.Pertanto, sono state ottenute conoscenze di base sull'attività larvicida e antitermite dei biotensioattivi microbici prodotti da Enterobacter cloacae SJ2.Abbiamo esaminato la mortalità e i cambiamenti istologici quando esposti a diverse concentrazioni di biosurfattanti ramnolipidici.Inoltre, abbiamo valutato il programma informatico Quantitative Structure-Activity (QSAR) ampiamente utilizzato Ecological Structure-Activity (ECOSAR) per determinare la tossicità acuta per microalghe, dafnie e pesci.
In questo studio, l'attività antitermite (tossicità) dei biotensioattivi purificati a varie concentrazioni comprese tra 30 e 50 mg/ml (a intervalli di 5 mg/ml) è stata testata contro termiti indiane, O. obesus e quarta specie )Valutare.Larve dello stadio Cx.Larve di zanzara quinquefasciatus.Concentrazioni di biosurfattante LC50 nell'arco di 48 ore contro O. obesus e Cx.C. solanacearum.Le larve di zanzara sono state identificate utilizzando un metodo di adattamento della curva di regressione non lineare.I risultati hanno mostrato che la mortalità delle termiti aumentava con l’aumento della concentrazione del biosurfattante.I risultati hanno mostrato che il biosurfattante aveva attività larvicida (Figura 1) e attività antitermite (Figura 2), con valori LC50 a 48 ore (IC 95%) di 26,49 mg/L (da 25,40 a 27,57 ) e 33,43 mg/ l (Fig. da 31.09 a 35.68), rispettivamente (Tabella 1).In termini di tossicità acuta (48 ore), il biosurfattante è classificato come “nocivo” per gli organismi testati.Il biosurfattante prodotto in questo studio ha mostrato un'eccellente attività larvicida con una mortalità del 100% entro 24-48 ore dall'esposizione.
Calcolare il valore LC50 per l'attività larvicida.Adattamento della curva di regressione non lineare (linea continua) e intervallo di confidenza al 95% (area ombreggiata) per la mortalità relativa (%).
Calcolare il valore LC50 per l'attività antitermite.Adattamento della curva di regressione non lineare (linea continua) e intervallo di confidenza al 95% (area ombreggiata) per la mortalità relativa (%).
Al termine dell'esperimento sono stati osservati al microscopio cambiamenti morfologici e anomalie.Cambiamenti morfologici sono stati osservati nei gruppi di controllo e trattati con ingrandimento 40x.Come mostrato nella Figura 3, si è verificato un deterioramento della crescita nella maggior parte delle larve trattate con biosurfattanti.La Figura 3a mostra un Cx normale.quinquefasciatus, la Figura 3b mostra un Cx anomalo.Causa cinque larve di nematodi.
Effetto di dosi subletali (LC50) di biosurfattanti sullo sviluppo delle larve di Culex quinquefasciatus.Immagine al microscopio ottico (a) di un Cx normale con ingrandimento 40 ×.quinquefasciatus (b) Cx anormale.Causa cinque larve di nematodi.
Nel presente studio, l'esame istologico delle larve trattate (Fig. 4) e delle termiti (Fig. 5) ha rivelato diverse anomalie, tra cui la riduzione dell'area addominale e danni ai muscoli, agli strati epiteliali e alla pelle.intestino medio.L'istologia ha rivelato il meccanismo dell'attività inibitoria del biosurfattante utilizzato in questo studio.
Istopatologia di larve Cx di 4o stadio normali non trattate.quinquefasciatus (controllo: (a,b)) e trattate con biosurfattante (trattamento: (c,d)).Le frecce indicano l'epitelio intestinale trattato (epi), i nuclei (n) e il muscolo (mu).Barra = 50 µm.
Istopatologia di O. obesus normale non trattato (controllo: (a,b)) e trattato con biosurfattante (trattamento: (c,d)).Le frecce indicano rispettivamente l'epitelio intestinale (epi) e il muscolo (mu).Barra = 50 µm.
In questo studio, ECOSAR è stato utilizzato per prevedere la tossicità acuta dei prodotti biotensioattivi ramnolipidici per i produttori primari (alghe verdi), i consumatori primari (pulci d'acqua) e i consumatori secondari (pesci).Questo programma utilizza sofisticati modelli quantitativi di composti struttura-attività per valutare la tossicità in base alla struttura molecolare.Il modello utilizza un software struttura-attività (SAR) per calcolare la tossicità acuta e a lungo termine delle sostanze per le specie acquatiche.Nello specifico, la Tabella 2 riassume le concentrazioni letali medie stimate (LC50) e le concentrazioni efficaci medie (EC50) per diverse specie.La tossicità sospetta è stata classificata in quattro livelli utilizzando il sistema globale armonizzato di classificazione ed etichettatura delle sostanze chimiche (Tabella 3).
Controllo delle malattie trasmesse da vettori, in particolare ceppi di zanzare e zanzare Aedes.Egiziani, ora lavoro difficile 40,41,42,43,44,45,46.Sebbene alcuni pesticidi disponibili chimicamente, come piretroidi e organofosfati, siano in qualche modo benefici, essi comportano rischi significativi per la salute umana, tra cui diabete, disturbi riproduttivi, disturbi neurologici, cancro e malattie respiratorie.Inoltre, col tempo, questi insetti possono diventare resistenti13,43,48.Pertanto, misure di controllo biologico efficaci e rispettose dell’ambiente diventeranno un metodo più popolare di controllo delle zanzare49,50.Benelli51 ha suggerito che il controllo precoce delle zanzare vettori sarebbe più efficace nelle aree urbane, ma non ha raccomandato l’uso di larvicidi nelle aree rurali52.Tom et al. 53 hanno inoltre suggerito che il controllo delle zanzare allo stadio immaturo sarebbe una strategia semplice e sicura perché sono più sensibili agli agenti di controllo 54 .
La produzione di biosurfattante da parte di un ceppo potente (Enterobacter cloacae SJ2) ha mostrato un'efficacia coerente e promettente.Il nostro studio precedente ha riportato che Enterobacter cloacae SJ2 ottimizza la produzione di biosurfattante utilizzando parametri fisico-chimici26.Secondo il loro studio, le condizioni ottimali per la produzione di biosurfattante da parte di un potenziale isolato di E. cloacae erano incubazione per 36 ore, agitazione a 150 giri al minuto, pH 7,5, 37 °C, salinità 1 ppt, 2% glucosio come fonte di carbonio, 1% lievito .l'estratto è stato utilizzato come fonte di azoto per ottenere 2,61 g/L di biosurfattante.Inoltre, i biosurfattanti sono stati caratterizzati utilizzando TLC, FTIR e MALDI-TOF-MS.Ciò ha confermato che il ramnolipide è un biosurfattante.I biosurfattanti glicolipidi rappresentano la classe più intensamente studiata tra gli altri tipi di biosurfattanti55.Sono costituiti da parti di carboidrati e lipidi, principalmente catene di acidi grassi.Tra i glicolipidi, i principali rappresentanti sono il ramnolipide e il soforolipide56.I ramnolipidi contengono due porzioni ramnosio legate all'acido mono o di β idrossidecanoico 57 .L'uso dei ramnolipidi nelle industrie mediche e farmaceutiche è ben consolidato 58 , oltre al loro recente utilizzo come pesticidi 59 .
L'interazione del biosurfattante con la regione idrofobica del sifone respiratorio consente all'acqua di passare attraverso la sua cavità stomatica, aumentando così il contatto delle larve con l'ambiente acquatico.La presenza di biosurfattanti colpisce anche la trachea, la cui lunghezza è vicina alla superficie, il che rende più facile per le larve strisciare in superficie e respirare.Di conseguenza, la tensione superficiale dell’acqua diminuisce.Poiché le larve non possono attaccarsi alla superficie dell'acqua, cadono sul fondo della vasca, interrompendo la pressione idrostatica, con conseguente dispendio energetico eccessivo e morte per annegamento38,60.Risultati simili sono stati ottenuti da Ghribi61, dove un biosurfattante prodotto da Bacillus subtilis ha mostrato attività larvicida contro Ephestia kuehniella.Allo stesso modo, l’attività larvicida di Cx.Das e Mukherjee23 hanno inoltre valutato l'effetto dei lipopeptidi ciclici sulle larve di quinquefasciatus.
I risultati di questo studio riguardano l'attività larvicida dei biosurfattanti ramnolipidici contro Cx.L’uccisione delle zanzare quinquefasciatus è coerente con i risultati pubblicati in precedenza.Ad esempio vengono utilizzati biotensioattivi a base di surfattina prodotti da vari batteri del genere Bacillus.e Pseudomonas spp.Alcuni dei primi rapporti64,65,66 riportavano l'attività di uccisione delle larve dei biotensioattivi lipopeptidici del Bacillus subtilis23.Deepali et al.63 hanno scoperto che il biosurfattante ramnolipidico isolato da Stenotropomonas maltophilia aveva una potente attività larvicida ad una concentrazione di 10 mg/L.Silva et al.67 hanno riportato l'attività larvicida del biosurfattante ramnolipidico contro Ae ad una concentrazione di 1 g/L.Aedes aegizi.Kanakdande et al.68 hanno riferito che i biotensioattivi lipopeptidici prodotti da Bacillus subtilis causavano la mortalità complessiva delle larve di Culex e delle termiti con la frazione lipofila dell'eucalipto.Allo stesso modo, Masendra et al.69 hanno riferito una mortalità della formica operaia (Cryptotermes cynocephalus Light.) pari al 61,7% nelle frazioni lipofile n-esano ed EtOAc dell'estratto grezzo di E..
Parthipan et al. 70 hanno riportato l'uso insetticida di biotensioattivi lipopeptidici prodotti da Bacillus subtilis A1 e Pseudomonas stutzeri NA3 contro Anopheles Stephensi, un vettore del parassita della malaria Plasmodium.Hanno osservato che le larve e le pupe sopravvivevano più a lungo, avevano periodi di ovideposizione più brevi, erano sterili e avevano una durata di vita più breve se trattate con diverse concentrazioni di biosurfattanti.I valori LC50 osservati del biosurfattante A1 di B. subtilis erano rispettivamente 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 e 7,99 mg/L per i diversi stati larvali (ovvero larve I, II, III, IV e pupe).In confronto, i biosurfattanti per gli stadi larvali I-IV e pupa di Pseudomonas stutzeri NA3 erano rispettivamente 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 e 6,99 mg/L.Si ritiene che il ritardo fenologico delle larve e delle pupe sopravvissute sia il risultato di significativi disturbi fisiologici e metabolici causati dai trattamenti insetticidi71.
Il ceppo Wickerhamomyces anomalus CCMA 0358 produce un biosurfattante con attività larvicida al 100% contro le zanzare Aedes.a Egypti intervallo di 24 ore 38 era superiore a quanto riportato da Silva et al.È stato dimostrato che un biotensioattivo prodotto da Pseudomonas aeruginosa utilizzando olio di girasole come fonte di carbonio uccide il 100% delle larve entro 48 ore 67 .Abinaya et al.72 e Pradhan et al.73 hanno anche dimostrato gli effetti larvicidi o insetticidi dei tensioattivi prodotti da diversi isolati del genere Bacillus.Uno studio precedentemente pubblicato da Senthil-Nathan et al.hanno scoperto che il 100% delle larve di zanzara esposte alle lagune vegetali avevano probabilità di morire.74.
Valutare gli effetti subletali degli insetticidi sulla biologia degli insetti è fondamentale per i programmi di gestione integrata dei parassiti perché dosi/concentrazioni subletali non uccidono gli insetti ma possono ridurre le popolazioni di insetti nelle generazioni future alterando le caratteristiche biologiche10.Siqueira et al. 75 hanno osservato un'attività larvicida completa (mortalità del 100%) del biotensioattivo ramnolipidico (300 mg/ml) quando testato a varie concentrazioni comprese tra 50 e 300 mg/ml.Stadio larvale dei ceppi di Aedes a Egypti.Hanno analizzato gli effetti del tempo intercorso fino alla morte e delle concentrazioni subletali sulla sopravvivenza delle larve e sull'attività natatoria.Inoltre, hanno osservato una diminuzione della velocità del nuoto dopo 24-48 ore di esposizione a concentrazioni subletali di biosurfattante (ad esempio, 50 mg/ml e 100 mg/ml).Si ritiene che i veleni che hanno promettenti ruoli subletali siano più efficaci nel causare danni multipli ai parassiti esposti76.
Le osservazioni istologiche dei nostri risultati indicano che i biosurfattanti prodotti dall'Enterobacter cloacae SJ2 alterano significativamente i tessuti delle larve di zanzara (Cx. quinquefasciatus) e termiti (O. obesus).Anomalie simili furono causate da preparazioni di olio di basilico in An.gambiaes.s e An.arabica sono stati descritti da Ochola77.Kamaraj et al.78 hanno descritto le stesse anomalie morfologiche anche in An.Le larve di Stephanie sono state esposte a nanoparticelle d'oro.Vasantha-Srinivasan et al.79 hanno anche riferito che l'olio essenziale della borsa del pastore ha danneggiato gravemente la camera e gli strati epiteliali di Aedes albopictus.Aedes aegizi.Raghavendran et al hanno riferito che le larve di zanzara sono state trattate con 500 mg/ml di estratto miceliale di un fungo Penicillium locale.Gli Ae mostrano gravi danni istologici.aegizi e Cx.Tasso di mortalità 80. In precedenza, Abinaya et al.Sono state studiate le larve di An del quarto stadio.Stephensi e Ae.a Egypti hanno riscontrato numerosi cambiamenti istologici nell'Aedes a Egypti trattati con esopolisaccaridi di B. licheniformis, tra cui cieco gastrico, atrofia muscolare, danno e disorganizzazione dei gangli delle corde nervose72.Secondo Raghavendran et al., dopo il trattamento con l'estratto miceliale di P. daleae, le cellule dell'intestino medio delle zanzare testate (larve del 4° stadio) hanno mostrato rigonfiamento del lume intestinale, una diminuzione del contenuto intercellulare e degenerazione nucleare81.Gli stessi cambiamenti istologici sono stati osservati nelle larve di zanzara trattate con estratto di foglie di echinacea, indicando il potenziale insetticida dei composti trattati50.
L'uso del software ECOSAR ha ricevuto riconoscimenti a livello internazionale82.La ricerca attuale suggerisce che la tossicità acuta dei biosurfattanti ECOSAR nei confronti delle microalghe (C. vulgaris), dei pesci e delle pulci d’acqua (D. magna) rientra nella categoria di “tossicità” definita dalle Nazioni Unite83.Il modello di ecotossicità ECOSAR utilizza SAR e QSAR per prevedere la tossicità acuta e a lungo termine delle sostanze ed è spesso utilizzato per prevedere la tossicità degli inquinanti organici82,84.
La paraformaldeide, il tampone fosfato di sodio (pH 7,4) e tutte le altre sostanze chimiche utilizzate in questo studio sono state acquistate da HiMedia Laboratories, India.
La produzione del biotensioattivo è stata effettuata in matracci Erlenmeyer da 500 mL contenenti 200 mL di mezzo Bushnell Haas sterile integrato con l'1% di petrolio greggio come unica fonte di carbonio.Una precoltura di Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU/ml) è stata inoculata e coltivata su un agitatore orbitale a 37°C, 200 giri al minuto per 7 giorni.Dopo il periodo di incubazione, il biosurfattante è stato estratto centrifugando il terreno di coltura a 3400×g per 20 minuti a 4°C e il surnatante risultante è stato utilizzato per scopi di screening.Le procedure di ottimizzazione e caratterizzazione dei biosurfattanti sono state adottate dal nostro studio precedente26.
Le larve di Culex quinquefasciatus sono state ottenute dal Center for Advanced Study in Marine Biology (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (India).Le larve sono state allevate in contenitori di plastica riempiti con acqua deionizzata a 27 ± 2°C e un fotoperiodo di 12:12 (luce:scuro).Le larve di zanzara sono state alimentate con una soluzione di glucosio al 10%.
Larve di Culex quinquefasciatus sono state trovate in fosse settiche aperte e non protette.Utilizzare linee guida di classificazione standard per identificare e coltivare le larve in laboratorio85.Gli studi larvicidi sono stati condotti in conformità con le raccomandazioni dell'Organizzazione Mondiale della Sanità86.SH.Le larve di quarto stadio di quinquefasciatus sono state raccolte in provette chiuse in gruppi da 25 ml e 50 ml con un traferro pari a due terzi della loro capacità.Il biosurfattante (0–50 mg/ml) è stato aggiunto a ciascuna provetta singolarmente e conservato a 25 °C.La provetta di controllo utilizzava solo acqua distillata (50 ml).Sono state considerate larve morte quelle che non mostravano segni di nuoto durante il periodo di incubazione (12–48 ore) 87 .Calcolare la percentuale di mortalità larvale utilizzando l'equazione.(1)88.
La famiglia Odontotermitidae comprende la termite indiana Odontotermes obesus, trovata nei tronchi in decomposizione presso il Campus agricolo (Università di Annamalai, India).Testare questo biotensioattivo (0–50 mg/ml) utilizzando le normali procedure per determinare se è dannoso.Dopo l'essiccazione in flusso d'aria laminare per 30 minuti, ciascuna striscia di carta Whatman è stata rivestita con biotensioattivo ad una concentrazione di 30, 40 o 50 mg/ml.Strisce di carta prepatinata e non patinata sono state testate e confrontate al centro di una capsula Petri.Ogni capsula Petri contiene circa trenta termiti attive O. obesus.Alle termiti di controllo e di prova è stata data carta bagnata come fonte di cibo.Tutte le piastre sono state mantenute a temperatura ambiente per tutto il periodo di incubazione.Le termiti morirono dopo 12, 24, 36 e 48 ore89,90.L'equazione 1 è stata quindi utilizzata per stimare la percentuale di mortalità delle termiti a diverse concentrazioni di biosurfattante.(2).
I campioni sono stati conservati su ghiaccio e confezionati in microprovette contenenti 100 ml di tampone fosfato di sodio 0,1 M (pH 7,4) e inviati al Central Aquaculture Pathology Laboratory (CAPL) del Rajiv Gandhi Center for Aquaculture (RGCA).Laboratorio di Istologia, Sirkali, Mayiladuthurai.Distretto, Tamil Nadu, India per ulteriori analisi.I campioni sono stati immediatamente fissati in paraformaldeide al 4% a 37°C per 48 ore.
Dopo la fase di fissazione, il materiale è stato lavato tre volte con tampone fosfato di sodio 0,1 M (pH 7,4), disidratato gradualmente in etanolo e immerso nella resina LEICA per 7 giorni.La sostanza viene quindi posta in uno stampo di plastica riempito con resina e polimerizzante, quindi posta in un forno riscaldato a 37°C fino alla completa polimerizzazione del blocco contenente la sostanza.
Dopo la polimerizzazione, i blocchi sono stati tagliati utilizzando un microtomo LEICA RM2235 (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, USA) ad uno spessore di 3 mm.Le sezioni sono raggruppate in diapositive, con sei sezioni per diapositiva.I vetrini sono stati asciugati a temperatura ambiente, quindi colorati con ematossilina per 7 minuti e lavati con acqua corrente per 4 minuti.Inoltre, applicare la soluzione di eosina sulla pelle per 5 minuti e risciacquare con acqua corrente per 5 minuti.
La tossicità acuta è stata prevista utilizzando organismi acquatici provenienti da diversi livelli tropicali: LC50 dei pesci a 96 ore, LC50 di D. magna a 48 ore e EC50 delle alghe verdi a 96 ore.La tossicità dei biotensioattivi ramnolipidici per i pesci e le alghe verdi è stata valutata utilizzando il software ECOSAR versione 2.2 per Windows sviluppato dalla US Environmental Protection Agency.(Disponibile online all'indirizzo https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Tutti i test per l'attività larvicida e antitermite sono stati eseguiti in triplicato.È stata eseguita una regressione non lineare (log delle variabili di risposta alla dose) dei dati sulla mortalità delle larve e delle termiti per calcolare la concentrazione letale mediana (LC50) con un intervallo di confidenza del 95% e le curve di risposta alla concentrazione sono state generate utilizzando Prism® (versione 8.0, GraphPad Software) Inc., Stati Uniti) 84, 91.
Il presente studio rivela il potenziale dei biotensioattivi microbici prodotti da Enterobacter cloacae SJ2 come agenti larvicidi e antitermiti contro le zanzare, e questo lavoro contribuirà a una migliore comprensione dei meccanismi dell'azione larvicida e antitermiti.Studi istologici su larve trattate con biosurfattanti hanno mostrato danni al tratto digestivo, all'intestino medio, alla corteccia cerebrale e iperplasia delle cellule epiteliali intestinali.Risultati: La valutazione tossicologica dell'attività antitermite e larvicida del biosurfattante ramnolipidico prodotto da Enterobacter cloacae SJ2 ha rivelato che questo isolato è un potenziale biopesticida per il controllo delle malattie trasmesse da vettori delle zanzare (Cx quinquefasciatus) e delle termiti (O. obesus).È necessario comprendere la tossicità ambientale sottostante dei biosurfattanti e il loro potenziale impatto ambientale.Questo studio fornisce una base scientifica per valutare il rischio ambientale dei biosurfattanti.
    


Orario di pubblicazione: 09-apr-2024